脂質およびドキソルビシン濃度をHPLCにより定量しました。
| Components | Interview Form of DOXIL® | Assay Values | % of Total Lipid |
|---|---|---|---|
| HSPC | 9.58 mg/mL | 9.74 mg/mL | 59.6% |
| Cholesterol | 3.19 mg/mL | 3.27 mg/mL | 20.0% |
| MPEG2000-DSPE | 3.19 mg/mL | 3.33 mg/mL | 20.4% |
| ドキソルビシン | 2.00 mg/mL | 2.00 mg/mL | - |
ドキソルビシンの封入率を測定するために、得られたリポソームを超遠心しリポソーム画分を回収後、HPLCによりドキソルビシン濃度を定量しリポソームに封入されたドキソルビシン濃度を測定しました。
The percentage of encapsulated Doxorubicin in DOXIL® from Presome ACD-1: 100%
得られたリポソーム液の平均粒子径、多分散指数（PDI）、ゼータ電位をMalvern Nano-ZSを用いた動的散乱光分析により測定しました。
図拡大In ζ-potential対Debye-Huckelパラメータプロット1)の近似曲線の傾きから、得られたリポソーム表面の水和層の厚さを測定しました。
| NaCl Conc. (C) | ζ-potential |
|---|---|
| 0 M | -36.05±2.20mV |
| 0.005 M | -19.36±0.25 mV |
| 0.010 M | -15.06±1.04 mV |
| 0.015 M | -12.26±1.79 mV |
| 0.050 M | -7.22±1.12 mV |
| 0.100 M | -4.75±1.14 mV |
The thickness of the fixed aqueous layer of DOXIL® from Presome ACD-1 : 2.1 nm
1) K. Shimada, A. Miyagishima, Y. Sadzuka, Y. Nozawa, Y. Mochizuki, H. Ohshima and S. Hirota, Determination of the thickness of the fixed aqueous layer around polyethyleneglycol-coated liposomes. Journal of Drug Targeting, 1995, 3, 283
Negative staining: The samples were let to absorbed 400 mesh carbon coated grid and were put into 2% phospho tungstic acid solution (㏗7.0) for a few seconds.
Observation and imaging: The samples were observed by a transmission electron microscope (JEM-1200EX; JEOL Ltd.,) at an acceleration voltage of 80 kV. Digital images (2048x2048 pixels) were taken with a CCD camera (VELETA, Olympus Soft Imaging Solutions GmbH).
以上のように、Presomeを用いて単一膜リポソームを調製することができました。また、リポソーム内水層にほとんどの薬物を保持し、脂質・薬物組成、平均粒子径、粒子分布、水和層の厚さはDOXIL®と同等であることが示されました。
これらのことより、
※必要に応じ、2～4は、繰り返し対応いたします。
日本精化リピット事業では、自社製造の豊富な高純度リン脂質シリーズを用いて、多くのリポソームへの薬物封入を経験しています。
また、Presomeシリーズもご用意しており、お客様のニーズに合わせたサービスのご提供が可能です。
基礎研究
前臨床
臨床試験
少～中量スケールまで対応できる様々なリポソーム製造装置を所有しておりますので、お客様のリポソーム開発に対する多様なご要望にお応えいたします。
